Fem styrker:
● Instrument konfigurert med nukleinsyreekstraksjon og renset trinn
● Instrument konfigurert med ultralydekstraksjonsmodul
● Instrument konfigurert med helautomatisk
● Instrument konfigurert med variabel temperaturforsterkning
● Instrument konfigurert med fullt vedlagt reagenssett
1. Må nukleinsyredeteksjonsreagenser ekstraheres og renses?
Prinsippet for nukleinsyredeteksjon er som følger: under påvirkning av primer brukes DNA-polymerase til å utføre kjedereaksjonsforsterkning på mal DNA/RNA (krever revers transkripsjon av NA), og deretter detekteres mengden fluorescerende signal som frigjøres for å bestemme om prøven inneholder nukleinsyren (DNA/RNA) til patogenet som skal påvises.
1) Prøver som ikke er ekstrahert eller renset kan inneholde mange komponenter som påvirker sluttresultatet: nuklease (som kan løse opp målnukleinsyren og forårsake falsk negativ), protease (som kan redusere DNA-polymerase og forårsake falsk negativ), tungmetall salt (som fører til inaktivering av syntase og forårsaker falsk positiv ), for sur eller for alkalisk PH (som kan føre til at reaksjonen mislykkes), ufullstendig RNA (som fører til falsk negativ revers transkripsjonssvikt).
2) Noen prøver er vanskelige å forsterke direkte: Gram-positive og noen parasitter, på grunn av deres tykke cellevegger og andre strukturer, hvis de ikke går gjennom nukleinsyreekstraksjons- og renseprosessen, kan det ekstraksjonsfrie settet mislykkes for slike prøver.
Derfor anbefales det å velge testsettet eller instrumentet som er konfigurert med nukleinsyreekstraksjonstrinnet.
2. Kjemisk utvinning eller fysisk ultralyd fragmenteringsekstraksjon?
Generelt sett kan kjemisk ekstraksjon brukes på det meste av forbehandlingen og rensingen.I tykkveggede grampositive bakterier og noen parasitter er det imidlertid også slik at kjemisk ekstraksjon ikke kan oppnå effektive nukleinsyremaler, noe som resulterer i falsk negativ deteksjon.I tillegg bruker kjemisk ekstraksjon ofte sterke midler, hvis elueringen ikke er grundig, er det lett å innføre sterk alkali i reaksjonssystemet, noe som resulterer i unøyaktige resultater.
Ultralydfragmentering bruker fysisk knusing, som har blitt brukt med suksess av GeneXpert, en ledende bedrift innen POCT for menneskelig bruk, og har en absolutt fordel i nukleinsyreekstraksjon av noen komplekse prøver (som Mycobacterium tuberculosis).
Derfor anbefales det å velge et testsett eller instrument konfigurert med et nukleinsyreekstraksjonstrinn.og det er optimalt hvis det er en ultralydekstraksjonsmodul.
3. Manuell, halvautomatisk og helautomatisk?
Dette er et problem med lønnskostnader og arbeidseffektivitet.For tiden er dyresykehus uten nok ansatte, og nukleinsyreutvinning og deteksjon et arbeid som krever visse ferdigheter og erfaring.Det er ingen tvil om at den helautomatiske nukleinsyreekstraksjons- og deteksjonsmaskinen er det perfekte valget.
4. Konstant temperaturforsterkning eller variabel temperaturforsterkning?
Amplifikasjonsreaksjonen er en nukleinsyredeteksjonskobling, og den profesjonelle teknologien involvert i denne koblingen er kompleks.Grovt sett brukes enzymer for å amplifisere nukleinsyren.I forsterkningsprosessen blir det forsterkede fluorescenssignalet eller det innebygde fluorescenssignalet oppdaget.Generelt sett, jo tidligere fluorescenssignalet vises, desto større er målgeninnholdet i prøven.
Konstant temperaturamplikasjon er en nukleinsyreamplikasjon ved en fast temperatur, mens variabel temperaturamplifikasjon er en syklisk amplifikasjon strengt tatt i henhold til denaturering-annealing-forlengelse.Den konstante temperaturforsterkningstiden har blitt utført, mens variabel temperaturforsterkningstid i stor grad påvirkes av hastigheten på temperaturstigning og -fall på instrumentet (for tiden har mange produsenter vært i stand til å utføre 40 sykluser med forsterkning på omtrent 30 minutter).
Hvis laboratorieforholdene er gode og soneinndelingen er streng, er det rimelig å si at nøyaktighetsforskjellen mellom de to ikke vil være stor.Variabel temperaturamplifikasjon vil imidlertid syntetisere flere nukleinsyreprodukter på relativt kortere tid.For laboratorier uten streng soneinndeling og profesjonelt opplæringspersonell vil risikoen for lekkasje av nukleinsyreaerosol være større, den falske positive oppstår når lekkasje skjer, og som er ekstremt vanskelig å eliminere.
I tillegg er konstant temperaturforsterkning også mer utsatt for ikke-spesifikk forsterkning når prøven er kompleks (den relative reaksjonstemperaturen er lavere, og jo høyere forlengelsestemperaturen er, desto bedre er primerbindingsspesifisiteten).
Når det gjelder dagens teknologi, er variabel temperaturforsterkning mer pålitelig.
5. Hvordan unngå risikoen for lekkasje av nukleinsyreamplikasjonsprodukter?
For tiden velger mange produsenter kjerteltypen PCR-rør som nukleinsyrereaksjonsrøret, som er forseglet ved friksjon, og temperaturdenatureringen i variabel temperaturdenaturering i PCR-amplikasjonen med variabel temperatur når 90 grader
Celsius.Den gjentatte prosessen med ekspansjon med varme og sammentrekning med kulde er en stor utfordring for tetting av PCR-røret, og PCR-røret av kjerteltype er relativt lett å forårsake lekkasje.
Det er å foretrekke å bruke reaksjonen med et fullstendig forseglet sett/rør for å unngå lekkasje av reaksjonsproduktet.Det ville være perfekt om det kunne utarbeides et fullstendig forseglet sett for nukleinsyreekstraksjon og deteksjon.
Så New Techs nye helautomatiske nukleinsyreekstraksjons- og deteksjonsmaskin har de ovennevnte fem optimale valgene.
Innleggstid: Aug-09-2023
